服務熱線
021-54479081
021-54461587
-
上海研域生物細胞珠免疫熒光速度快的特點
發布時間： 2024-06-25 點擊次數： 1991次細胞株免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內信號轉導，細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒光標記技術相結合，原理就是利用抗原-抗體反應之后，采用熒光標記，標記完成后，顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少。
從而做出一個定位研究，也可以為細胞內信號傳導提供一個明確的指導，細胞免疫熒光具有敏感性強、特異性高、速度快的特點，是目前比較常用的組織學技術，也是比較準確的。一、實驗方法原理
在進行細胞免疫熒光過程中，需要用到細胞爬片，通過將爬片浸在細胞培養基內，細胞在爬片上生長，進而進行細胞的免疫熒光。
二、實驗材料
1. 細胞樣品。
2. 試劑、試劑盒：多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油。
3. 儀器、耗材：玻片。
三、細胞株爬片免疫熒光實驗步驟1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min。
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟)。
4. PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min。
5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜。
6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min。注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。
7. 復染核：滴加DAPI避光孵育5min，對標本進行染核，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI。
8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
注意事項1.取細胞株爬片時，動作應輕柔，防止將細胞爬片夾碎，影響實驗進程。
2.種細胞過程中，要注意將細胞輕柔混勻，“八"字或者“十"字形搖晃，防止細胞局部生長過密。
將在力所能及的范圍內，竭誠為您提供支持，我們保證產品的性質穩定如一，細胞株為您的實驗保駕護航，保證安全快速高效放心的送至客戶的手中。如您有技術問題，請通過發郵件的方式，將您的技術問題發給我們，非質量問題的退換貨，請您及時與客服人員聯絡。方便產品名稱將及時為您解決。
產品中心
Products