2014年大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫分析

發(fā)布時間： 2014/4/11　　點擊次數(shù)： 804次

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大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
70ng/L -2300ng/L

大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中熱休克蛋白27（HSP-27）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）水平。用純化的大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入熱休克蛋白27（HSP-27），再與HRP標記的熱休克蛋白27（HSP-27）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的熱休克蛋白27（HSP-27）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）濃度。
試劑盒組成
1   30倍濃縮洗滌液   20ml×1瓶   7   終止液   6ml×1瓶
2   酶標試劑   6ml×1瓶   8   標準品（4000ng/L）   0.5ml×1瓶
3   酶標包被板   12孔×8條   9   標準品稀釋液   1.5ml×1瓶
4   樣品稀釋液   6ml×1瓶   10   說明書   1份
5   顯色劑A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2張
6   顯色劑B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1個
大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）ELISA試劑盒標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2000ng/L   5號標準品   150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1000ng/L   4號標準品   150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
500ng/L   3號標準品   150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
250ng/L   2號標準品   150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
125ng/L   1號標準品   150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結：

大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）ELISA試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
大鼠熱休克蛋白27（HSP-27）ELISA試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月

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