二胺氧化酶（DAO）ELISA試劑盒實驗通用規(guī)則

發(fā)布時間： 2015/10/7　　點擊次數(shù)： 944次

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二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒檢測原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人DAO抗體包被于酶標板上，實驗時標本或標準品中的DAO會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人DAO抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人DAO抗體與結(jié)合在包被抗體上的人DAO結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍色，加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值，DAO濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線求出標本中DAO的濃度。

二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒實驗通用規(guī)則：
1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%.可用水和電子天平進行確定。但有專業(yè)人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4、實驗時，要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
13、檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。
16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
17、應(yīng)盡量做雙孔實驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準確性。
18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。

二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒標本收集：
血清：全血標本于室溫放置2小時或4℃夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。血漿：抗凝劑推薦使用EDTA，標本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂標本。其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測標本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，6個月內(nèi)進行檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測。如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

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