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完整的ELISA試劑盒
發(fā)布時間： 2014-07-29 點擊次數(shù)： 1234次
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；酶標記的抗原或抗體（結合物）；酶的底物；陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考尺度品和控制血清（定量測定中）；酶聯(lián)物（結合物）及標本的稀釋液；洗滌液；酶反應終止液。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。
ELISA載體的外形主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。良好的ELISA板應該是吸附機能好，空缺值低，孔底透明度高，各板之間、統(tǒng)一板各孔之間、統(tǒng)一板各孔之間機能相近。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結合位點的暴露面處于*反應狀態(tài)，因此珠式ELISA的反應往往更為敏捷。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結多發(fā)生在Fc段上，抗體結合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。
疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的前提下一般可保留6個月以上。可作ELISA中載體的材料良多，zui常用的是聚苯乙烯。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應后用磁鐵的吸引進行分離，洗滌利便，ELISA試劑盒一般均配以特殊儀器。為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣，可應用如下的試驗：用其他免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本，將它們進行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預定的ELISA操縱步驟進行測定，然后比較結果。小試管還可以當作比色杯，zui后直接放入分光光度計中比色。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大進步，因此含雜質較多的抗原也可采用捕捉包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復性亦佳。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的機能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后仍留存原來的免疫學活性，加之它的價格低廉，所以被普遍采用。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用力。控制反應前提，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應小于10%。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，并可在特制的比色計上迅速讀出結果。換言之，包被等于抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。在哪一種載體上陽性結果與陰性結果差別zui大，這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。
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